激光共聚焦顯微鏡以激光作為光源。樣品被放置在載物臺(tái)上,由激光器發(fā)出的激光束通過(guò)物鏡準(zhǔn)確地聚焦在樣品表面的特定點(diǎn)。如果樣品中有熒光物質(zhì),該點(diǎn)的熒光物質(zhì)會(huì)受到激光的激發(fā)而產(chǎn)生熒光信號(hào)。
針孔過(guò)濾:在探測(cè)器前設(shè)置了一個(gè)針孔裝置,這是其關(guān)鍵技術(shù)之一。只有來(lái)自焦平面上的熒光信號(hào)能夠通過(guò)這個(gè)針孔到達(dá)探測(cè)器,而焦平面以外的散射光、雜散光等模糊背景光則會(huì)被針孔阻擋掉。這種設(shè)計(jì)有效地排除了非焦平面光線(xiàn)的干擾,大大提高了成像的清晰度和對(duì)比度。
掃描成像:通過(guò)對(duì)樣品進(jìn)行逐點(diǎn)掃描的方式,收集不同位置的熒光信息。隨著掃描過(guò)程的進(jìn)行,可以獲取一系列二維光學(xué)橫斷面圖像。計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對(duì)這些圖像進(jìn)行處理和整合,能夠重構(gòu)出樣品的三維結(jié)構(gòu)模型,實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品內(nèi)部的觀(guān)察和分析。
激光共聚焦顯微鏡的使用注意事項(xiàng):
1.操作規(guī)范方面
-嚴(yán)格遵循規(guī)程:必須嚴(yán)格按照設(shè)備的使用規(guī)則操作,不得隨意更改操作程序。
-保護(hù)激光管:激光發(fā)射管使用壽命有限且價(jià)格昂貴,在開(kāi)關(guān)機(jī)順序以及掃描過(guò)程中都要注意對(duì)其加以保護(hù)。
2.安全防護(hù)方面
-防止激光傷害:小心不要接觸中等功率和高功率的激光輻射。切勿將布或紙等易燃材料放在光路中,也不要在共焦顯微鏡附近存放或使用易燃、易爆物質(zhì)。
-環(huán)境要求:設(shè)備應(yīng)放置在穩(wěn)固、干燥、通風(fēng)良好的環(huán)境中,遠(yuǎn)離有潮濕氣氛或者有化學(xué)氣味的區(qū)域。
3.樣品處理方面
-固定樣品:對(duì)于生物樣品,常用甲醛、戊二醛等固定劑進(jìn)行固定,以防止樣品在后續(xù)處理過(guò)程中發(fā)生降解或變形。
-控制環(huán)境穩(wěn)定性:若進(jìn)行活細(xì)胞成像,需要穩(wěn)定的溫控環(huán)境。應(yīng)提前打開(kāi)溫控設(shè)備,確保溫度、二氧化碳濃度和濕度等條件符合細(xì)胞生長(zhǎng)要求;同時(shí),長(zhǎng)時(shí)間成像過(guò)程中要避免外界干擾,如震動(dòng)、氣流等。
4.日常維護(hù)方面
-清潔保養(yǎng):使用完畢后,要及時(shí)清洗載物臺(tái),并用干凈柔軟的毛巾擦拭顯微鏡外部,防止灰塵堆積。定期檢查設(shè)備各部件是否正常,如有異常應(yīng)及時(shí)聯(lián)系專(zhuān)業(yè)人員維修。